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聚丙烯酰胺凝膠電泳凝膠的配置過程?

編輯:潔康環保   發布時間:2018-01-27 10:54:50    來源:http://m.dqrose.cn/   點擊:0
聚丙烯酰胺凝膠電泳凝膠的配置過程
   
    (1)制膠 在兩塊制膠玻璃板中間放上墊片,放上制膠架,擰緊制膠螺絲夾緊玻璃板。 制備適量合適濃度的凝膠,使之略多于膠板。
 
     不同濃度(%)聚丙烯酰胺凝膠的制法:
 
     在加入 TEMED 和 10%過硫酸銨后,立即混勻,倒入放置 45℃角的玻璃板內,完全注滿(注 意不要有氣泡) ,迅速將玻璃板放置水平位置。立即放成型梳子于腔頂并夾緊,待 30-60 分 鐘膠聚合后,取下膠板,放入電泳槽中固定。
 
    (2)加樣和電泳 上下槽中加入 1×TBE 電泳緩沖液,溢過加樣孔,拔出梳子,排出加樣孔中的氣泡,將 PCR 產物或限制性內切酶消化產物 2 與 1 上樣緩沖液混勻, 用微量注射器加入加樣孔底部, 使樣 品在孔底成一層,兩側孔中加入標準分子量的 DNA Marker。 以 2-10V/cm 電壓電泳,電泳時間足夠長,使片斷足以分開,待指示劑走到適宜位置時關閉 電源,將膠片取出。
 
     (3)銀染 分開兩塊玻璃板, 將凝膠片放入 100ml 銀染固定液中振蕩 15min, 雙蒸水洗 3 次, 每次 2min, 然后將凝膠片轉入 100ml 0.2%的 AgNO3 中于搖床上染色約 10min,吸去 AgNO3 液,用雙蒸 水洗 3 次,每次 30s,加入 100ml 顯色液約 7-10min,待 DNA 帶顯示清除時,吸去顯色液, 加入固定液 Na2CO3,靜置 2-3min,取出凝膠觀察。


 
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